Innanzitutto è necessario dividere la struttura elicoidale. Per fare ciò è necessario un enzima, l'elicasi.
Il suo compito è quello di rompere i legami a idrogeno che sono presenti tra le basi azotate, riuscendo così a separare i due filamenti di elica.
Una volta separate, ognuna di queste due parti di DNA diventerà lo stampo sul quale si posizioneranno dei nucleotidi presenti nella cellula, complementari secondo l'ordine A-T e C-G, ricreando così il codice iniziale.
Lungo il filamento 5'3' la polimerasi 3 percorre la sua strada senza interruzioni, riuscendo a posizionare gli esatti nucleotidi con precisione e velocità.
Lungo il filamento 3'5', invece, è necessario che si alternino primer di RNA e frammenti di Okazaki, i quali verranno poi, grazie alla polimerasi 1 e 3, sostituiti con primer di DNA.
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